Dr. Darío Veretnik*
Todas las consideraciones respecto a la obtención de la información,
intencionalidad de la presentación y obligaciones hacia todas las personas
involucradas en la causa "Ángeles Rawson" han sido expresadas en la introducción
del Expert Witness Report Nº1 . Todos estos aspectos siguen válidos para
este segundo reporte.
Mi reconocimiento y profunda gratitud a todas aquellas personas que han
hecho posible la preparación de este reporte y el anterior en distintos
aspectos de su preparación. Cada uno/una por distintos motivos ha preferido
conservar el anonimato. Se les ha respetado su opción.
Continuando con la investigación sobre la información que hemos podido
obtener y asumiendo que dicha información es válida en la causa mencionada, se
hace estrictamente necesario notar a los letrados de la defensa de JM y al público
en general efectos experimentales de
singular importancia en la corrida de estudio de ADN de imputado JM.
Gráficos M30
Disponemos de los gráficos de las corridas de muestras ADN referentes a la muestra
nombrada “M30 MJN-, que de acuerdo a la tabla acompañante expresa que los gráficos
pertenecen a la muestra de "M30 Siembra hemática-J N M Fjs. 812". Es necesario mencionar que los gráficos no
poseen ni fecha ni hora de corrida. Solo al pie de página figura la fecha
de impresión del reporte.
Asimismo, y como dato pertinente,
consignamos que la tabla acompañante no
posee ni sello ni firma de autoridad responsable, ni cumple con los requisitos
del software, es decir, encabezado, pie de página, membrete, ni fecha u hora de confección.
La serie de gráficos representados más arriba en este texto,
corresponden todos a la muestra hemática de JM. La información incluida en
estos gráficos, la cual es conocida en este medio como los estándares de los
sujetos, se obtiene para comparar los perfiles presentes en la evidencias con
los perfiles de los presuntos participantes
|
En el primer gráfico se observan los alelos que representan los llamados
cromosomas sexuales, en este caso de muestras de JM, se observan la presencia
de los fragmentos X e Y. JM es un individuo de sexo masculino. Aparte de estos
elementos identificatorios del sexo, también
en este gráfico se observan los sistemas D3, D1, D6, D13 y Penta E. Estas
siglas por lo general representan las primeras letras de los sistemas. Se puede
observar los sistemas en la parte superior del gráfico en cuestión. Para
referirnos en este gráfico al aspecto de INTENSIDAD DE ALELOS, diremos que:
- Explicado en forma simple, los alelos de determinación de sexo provienen de cromosomas singulares. Por lo tanto la intensidad de estos alelos es aproximadamente el 50% del valor promedio de cualquier otro sistema heterozigota (sistema que posee 2 alelos).
Entonces se podría expresar que la intensidad de
cualquier otro alelo en un sistema heterozigota estaría en promedio en el valor
de las 11,000 unidades de intensidad.
- Como mencionamos en el reporte anterior, estos valores de cualquier alelo heterozigota podrían estar entre un 70 y 130% del doble de la magnitud de los cromosomas sexuales.
Cuando los valores de intensidad están fuera de la
norma, tanto para arriba como para abajo, indica que podría haber alelos
pertenecientes a otras personas ocluidos debajo de lo que estamos
observando. O por el contrario también, que el proceso de preparación de la muestras
posee una impurificación o ha sido efectuado con problemas tecnológicos
- Sistema D3 la intensidad de los alelos se ajustan a la norma de la intensidad de los alelos sexuales.
- Sistema D1, las intensidades de los alelos están totalmente fuera de la norma;
- Sistema D6, el alelo 12, que por ser homozigoto (solitario) debería poseer una intensidad de unas 20,000 unidades, está fuera de la norma.
- Sistema D13 dentro de la norma
- Sistema Penta E, alelo 13 está fuera de la norma, de comparación de intensidades con los alelos sexuales.
El Segundo gráfico desde arriba muestra la distribución alélica de los
siguientes sistemas: D16, D18, D2, CSF1PO y Penta D. La INTENSIDAD DE LOS
ALELOS aquí, y recordando que deberían manifestarse en una media de 11,000, se
expresa en valores como:
- Sistema D16, fuera de la norma expresada, con valores superiores en un 40% aproximadamente
- Sistema D18, fuera de la norma expresada valores aún más dispares, 18,000 y 15,000 en cifras redondas.
- Sistema D2, las intensidades alélicas están de acuerdo con la norma de las intensidades de los alelos sexuales
- Sistema CSF1PO, estaría dentro de la norma como alelo homozigota
- Sistema PentaD intensidad alélica, con valores de intensidad muy exiguos, fuera de la norma
El tercer gráfico desde arriba muestra la distribución alélica de los
siguientes sistemas: THO1, vWA, D21, D7, D5 yTPOX;
- Sistema TH01 posee una intensidad alélica de cada uno superior a la correspondiente a los alelos sexuales. Fuera de norma.
- Sistema vWA, posee una intensidad alelica 200% superior a la que correspondería a los alelos sexuales. Fuera de norma.
- Sistema D21 la intensidad se nivelan de acuerdo a la norma establecida previamente,
- Sistema D7 estaría dentro de las norma.
- Sistema D5, alelo homozigota en D5, claramente debajo de la norma. Fuera de norma.
- Sistema TPOX, apenas entrando en la norma
El cuarto gráfico desde arriba muestra la distribución alélica de los
siguientes sistemas: D8, D12, D19 y FGA con valores dispares
- Sistema D8, al alelo 15 debajo de la norma de la intensidad de los alelos sexuales. Fuera de norma.
- Sistema D12, ambos alelos superando ampliamente en un 100 y un 300% aproximadamente.
- Sistema D19 superando la norma ampliamente, en más de un 100%
- Sistema FGA dentro de la norma de las intensidades de los alelos sexuales
En definitiva, son realmente escasos los alelos en un número de sistemas
que respetan los valores de la norma 11,000 para la muestra M30 JM.
Tal
como venimos de explicar en este informe, las intensidades alélicas de
distintos sistemas poseen valores no concordantes. Este efecto indica
claramente la existencia de varias alternativas en esta muestra.
A) impurificación con muestras de un tercero o
más sujetos de la misma composición alélica
B)
inconvenientes en la corrida de la muestra en algunos de los pasos cruciales
como amplificación o separación electroforética y
C)
posibilidad que alelos sexuales no pertenezcan a la muestra analizada.
Importante aclarar es que a diferencia de lo explicado en el informe 1,
con respecto a las muestras de AR, en donde había una disminución importante en
las intensidades de los picos a medida que nos movíamos hacia la derecha del
gráfico. Este efecto, como fue explicado oportunamente, se debería a una
extensa descomposición de la muestra
analizada ya sea en la etapa de muestreo, conservación o análisis. En el caso
de la muestra de JM no se observa tal efecto de descomposición. En JM, el
argumento de la impurificación se sustenta en el hecho de que las intensidades no son concordantes
con los alelos sexuales a la par que también presentan una incoordinación de
valores que estarían indicando la presencia de material genético ocluido, por
impurificación en algunas de las etapas de muestreo, conservación o analizado.
Recordar que a medida que nos movemos hacia la derecha del gráfico (mayor peso
molecular o extensión de los fragmentos alélicos).
Por lo tanto, se descarta totalmente una descomposición de la muestra JM
en cuestión, pero en absoluto se puede
descartar la presencia de una contaminación. Y en esta línea de
razonamiento vamos a demostrar más adelante en el presente reporte el
sustento de nuestros argumentos
|
ÍTEM 2: PICOS “STUTTERS” Y ALELOS.
Los “Stutters”: son siempre
resultado de una pérdida de eficiencia en la automultiplicación de la cantidad
de muestra. Los "Stutters" son fragmentos alélicos q poseen
errores de copiado del ADN. Por lo tanto son apenas más cortos en algunas unidades
de los alelos que son importantes en la caracterización de la muestra.
Si tenemos un alelo de valor (n), los “stutters” aparecen en valores
(n-1), o (n-2) así sucesivamente. Cuanto
más lejos del pico madre, más improbable es la existencia de estos “stutters”
Observando todos los sistemas, con extrema atención y con la ayuda de
una lente de aumento se puede observar hacia la izquierda de la mayoría de los
picos principales en todos los gráficos, pequeños picos. (Izquierda siempre
mirando a los picos de frente).
Este efecto de pequeños picos “Stutters” hacia la izquierda de los picos
principales se observa en los siguientes sistemas:
Sistema D6 en el alelo 12
Sistema D18 en el alelo 16
Sistema CSF1PO en el alelo 12
Sistema vWA en el alelo 16
Sistema D12 en los alelos
18 y 23
Hasta aquí los gráficos no presentan ninguna otra particularidad.
ÍTEM 3 “ENIGMAS
EXPERIMENTALES”
Los
siguientes gráficos muestran efectos experimentales que deben ser explicados por el laboratorio SHDG de
la Facultad de Farmacia y Bioquímica, dirigido por el Dr. Daniel Corach.
|
Las Particularidades se observan aquí:
En el sistema D19, donde ambos alelos poseen una intensidad que duplica
aquella que debieron tener si seguimos
la regla de intensidades de los alelos sexuales (11,000 unidades), se observa
también la presencia de picos “stutters” (flechas rojas) a la izquierda de los
picos mayores.
Además de los picos Stutters de
los alelos 12 y 14, También se observa hacia la derecha del
alelo 14 un pico extremadamente pequeño en comparación al alelo 14 (pero
ubicado hacia la derecha, flecha de color verde). Este pico no es un
pico “Stutter” por la naturaleza de su definición teórica
|
Cabe recordar que los picos de mayor intensidad que se observan en el gráfico
pertenecerían al aportante
mayoritario que aparentemente en
este caso es JM.
La presencia de este pico a la derecha del alelo 14 en sistema D19 (pico
llamado alelo UNK, unknown, (desconocido),
está indicando indefectiblemente que en este sistema la muestra de JM posee 3
alelos.
A) Esta
situación ocurre cuando hay una superposición con material genético de otro
sujeto. Por causa de esta superposición,
no es posible observar los otros alelos.
B)O podría ser el caso que JM posee una mutación genética donde en este preciso sistema JM posee un perfil tri-alélico.
Esta encrucijada sería muy
fácil de resolver. Básicamente es de extrema importancia correr muestras
adicionales de JM y observar si es poseedor de una mutación genética en el
sistema D19. Caso contrario estamos
ante la presencia de picos adicionales en el perfil genético de JM y por lo
consiguiente esta muestra debería ser invalidada.
|
B)
Nota: De extrema importancia es mencionar que de
acuerdo a la tabla de datos: Muestra M14, perteneciente a AR (fragmento de músculo-autopsia),
demuestra la presencia de alelo 15
en la muestra D19.
Por lo tanto la presencia de un “Alelo 15” en muestra de JM, indicaría
la evidencia necesaria de existencia de un “cross-contamination”
(contaminación cruzada) en la muestra de JM.
|
Para continuar en esta dirección, con
respecto a la presencia de material de contaminación en las muestras
pertenecientes a JM, es importante presentar una situación experimental que
es observable en el sistema D2
En este sistema D2 se observa un
pico hacia la izquierda bien alejado del alelo 18. De acuerdo a la
distancia proporcional en que aparece debería
ser un alelo de valor 13 aproximadamente.
Quiere decir que este pico podría
tener 2 tipos de explicaciones.
A) es un pico “Stutter” existente
a (n-5) o más lejos del pico alelo 18, o
B) es un alelo 12 o 13 en el sistema que estamos discutiendo.
Las 2 alternativas son de muy baja probabilidad de existencia. Un
Stutter (n-5) ya de por sí es una situación muy difícil de ocurrir, y por el
contrario de acuerdo a las tablas de frecuencia de Promega con respecto a la existencia de alelos 12 o 13 en el sistema
D2S1338, nos informan que estos alelos son inexistentes. Recordemos además que tampoco
aparece este sistema en la base de datos del SDHG, Sistema de Huellas Digitales
Genéticas del Laboratorio que dirige el Dr. Corach.
Ahora bien, habría que hacer un análisis en contexto
general. Y para eso tomamos la escala que existe inmediatamente debajo del
nombre de los sistemas. Esta escala es la que representa el número de bases
apareadas en la cadena de ADN. Es un parámetro de la extensión de la cadena que
estamos analizando.
Podemos observar que en el caso de este pico extraño en el sistema D2,
llamado alelo X(D2) que aparece a una distancia hacia la izquierda del hito 240 de la escala de número de
bases.
Coincidentemente también aparece a una distancia similar a la
izquierda del hito 240 el pico UNK en el sistema D19, que hemos descripto
anteriormente.
Cabe destacar que estos picos pertenecen a paneles de distinto color
de revelado del gráfico y que la computadora del instrumental los separa
cuando imprime en distintos gráficos.
Y también es la región donde aparece el alelo 12 del sistema D6. El
cual es un alelo homozigota y que posee un 200% de incremento con respecto a
los estándares de intensidad de los alelos sexuales.
|
RESUMEN:
a.- Existe un número importante de alelos en distintos sistemas cuyas
intensidades no coordinan con un estándar de intensidades de los alelos
sexuales. Las intensidades de estos picos llegan a multiplicar por 2 o 3 veces
el valor de intensidades que deberían poseer. Esta observación experimental
indica que en estos sistemas una circunstancia en el procedimiento que no se ha
realizado correctamente, hasta indicar sin dudas un agregado de material
genético.
b.- De no estimarse que haya un agregado de material genético, hemos
demostrado por otra parte que las
intensidades de los alelos sexuales no coordinan con estos valores de
intensidad. Por lo tanto estos podrían ser ajenos a la muestra analizada de JM.
c.- En ambos casos citados hasta
aquí en el resumen, existen las evidencias científicas de material genético
adicionado debido a que los cálculos relativos de intensidades no cierran una
evaluación matemática clásica en estos estudios.
d.- Se observa la existencia de 2 picos en 2 sistemas genéticos D19 y
D2, cuya presencia no son justificables
con las herramientas científicas de este tipo de análisis.
En el sistema D19 el pico “UNK” aparece hacia la derecha del alelo de
mayor tamaño el número 14, por lo tanto no es posible de justificarlo como pico
“Stutter”.
En el sistema D2 el pico X, aparece hacia la izquierda en un valor de
alelo 12 o 13, los cuales no han sido
reportados por el fabricante de los kits utilizados en el análisis.
En caso que JM sea poseedor de una mutación
genética de extrema rareza, estos efectos serian visibles en nuevas
muestras que se podrían obtener del imputado. De no repetirse el efecto
estaríamos ante la presencia clara
de una impurificación en la obtención, conservación, amplificación o separación
de las muestras.
e.- La zona de elución o “migration time” de los picos “UNK” en el
sistema D19 o del pico “X” en el sistema D2 son coincidentes, ambos aparecen a
una distancia similar: a la izquierda del hito 240 en la escala de número de
bases.
En este “migration time” o tiempo de elución también aparece el pico
alelo 12 del sistema D6S1043 que posee una intensidad de unos 200% superior a la norma cuando lo
presentamos relativo a los alelos sexuales.
CONCLUSIÓN:
De acuerdo a lo observado,
estamos ante un número de evidencias que indicarían sin discusión una contaminación de la muestra de JM, la
cual se expresa claramente a través de
la información gráfica.
Es estrictamente recomendable
proceder a una extensa investigación sobre la existencia de impurificaciones
en los análisis de ADN en muestra JM antes de obtener conclusiones si estas
muestras podrían ser utilizadas en el establecimiento de una condena
definitiva.
|
Fin del documento
Dr. Darío Veretnik
13 de Octubre de 2013.
*Scientific and Quality Inspection at Drug
Testing and Medical Labs. Forensic Analytical Toxicology. Criminal Poisoning
Cases. DNA Identification.VEL Tox and DNA consulting Inc. Director
toxenv@gmail.com
No hay comentarios:
Publicar un comentario